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藥物分析中液相色譜柱的常見問題盤點(diǎn)

來源：測試GO 時(shí)間：2022-11-15 14:00:24 瀏覽：3279次

Q1、什么是反相柱、正相柱？

液相色譜儀

答：“反相”和“正相”的概念是液相色譜法早期提出的概念，當(dāng)時(shí)鍵合相色譜柱尚未出現(xiàn)，固定相被涂覆在載體表面，極易流失，為此科學(xué)家對流動相使用給出了合理的建議：流動相極性與固定液極性應(yīng)具有較大差別，以減少固定液流失。固定相極性弱于流動相時(shí)的液相色譜法被稱為反相色譜法，固定相極性強(qiáng)于流動相時(shí)的液相色譜法被稱為正相色譜法。盡管目前鍵合相色譜柱已成為主流，但這一概念在色譜方法開發(fā)、預(yù)測出峰順序等方面具有重要意義。

由上面的介紹可知具體的色譜方法、色譜柱屬于正相還是反相不僅取決于固定相極性，同時(shí)還取決于流動相極性。C18（硅膠鍵合十八烷基硅烷）、C8（硅膠鍵合辛基硅烷）、PH（硅膠鍵合苯基硅烷）等色譜柱，由于固定相極性極低，比目前已知的任何流動相的極性都要低，因而是標(biāo)準(zhǔn)的反相柱；

Silica（硅膠）、NH2（硅膠鍵合氨丙基硅烷）具有較高的極性，主要用于分離帶有極性基團(tuán)的化合物，所用流動相的極性通常低于這些固定相，因而是標(biāo)準(zhǔn)的正相柱。CN（硅膠鍵合腈丙基）的極性適中，當(dāng)流動相極性超過CN時(shí)，它屬于反相柱，反之則是正相柱。

Q2、色譜柱規(guī)格對分析結(jié)果會產(chǎn)生何種影響？

答：色譜柱內(nèi)徑?jīng)Q定載樣量，載樣量與內(nèi)徑的平方成正比；色譜柱長度與塔板數(shù)成正比，與柱壓成正比；粒徑影響渦流擴(kuò)散相，粒徑越小渦流擴(kuò)散相越小，柱效越高，粒徑與柱效近似成反比；粒徑越小，壓力也越大，壓力與粒徑的平方成反比。填料孔徑對分析對象的分子量有限制，當(dāng)孔徑為分析物尺寸的5倍以上時(shí)，分析物才能順利通過孔隙，孔徑處于60~120 ?的色譜柱適用于相對分子量小于10000的分析物，孔徑為300 ?的色譜柱可以滿足分子量處于10000以上的大分子化合物分析。

Q3、柱床塌陷和鍵合相塌陷

答：柱床塌陷是指色譜柱使用一段時(shí)間后色譜柱入口處的柱床產(chǎn)生可見的空隙。該空隙的存在增大了死體積，會導(dǎo)致色譜柱柱效下降。造成柱床塌陷的原因如下：

其一，色譜柱填裝時(shí)的壓力過低，填裝不緊密，在高壓下使用一段時(shí)間，開始出現(xiàn)空隙；

其二，操作壓力超出色譜柱填料的耐壓值，導(dǎo)致填料顆粒破碎產(chǎn)生空隙；

其三，流動相溶解填料導(dǎo)致空隙出現(xiàn)。鍵合相塌陷是指由于流動相極性與鍵合相極性相差太大，鍵合相無法在流動相中充分伸展而倒伏、纏結(jié)在一起，比如普通C18在純水相條件下。相塌陷會導(dǎo)致色譜柱對化合物的保留不足。

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