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微觀偵探：ELISA酶聯(lián)免疫吸附測試

來源：時間：2024-05-20 10:01:19 瀏覽：2375次

微觀偵探：ELISA酶聯(lián)免疫吸附測試

ELISA酶聯(lián)免疫吸附測試（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一種用于檢測和定量蛋白質、肽、抗原、抗體等生物分子的免疫學分析方法；作為一種高靈敏度、高特異性的檢測技術，ELISA在生物科研、臨床診斷、疾病監(jiān)測、疫苗研發(fā)等領域發(fā)揮著重要作用。

一、原理

ELISA技術基于抗原與抗體之間的特異性結合反應。

在ELISA實驗中，待檢測的生物分子（抗原）首先與固相載體上的抗體結合，然后加入酶標記的二抗，最后通過添加底物并測量酶促反應的產(chǎn)物生成量，從而間接反映出待檢測生物分子的含量。

二、分類

根據(jù)檢測目標物的不同，ELISA技術可分為以下幾種類型：

1. 直接ELISA：待檢測抗原與固相抗體直接結合，然后加入酶標記的二抗進行檢測。

2. 間接ELISA：先將待檢測抗原與固相抗體結合，再加入酶標記的抗體進行檢測。

3. 競爭ELISA：待檢測抗原與酶標記抗體競爭性地與固相抗體結合，通過測量酶標記抗體與固相抗體的結合量來反映待檢測抗原的含量。

4. 夾心ELISA：利用兩種不同抗原決定簇的抗體分別固定在固相載體和酶標記載體上，待檢測抗原位于兩者之間，形成“夾心”結構，通過測量酶標記抗體與固相抗體的結合量來反映待檢測抗原的含量。

三、步驟

1. 包被：將抗體或抗原固定在固相載體（如微孔板）上。

2. 洗滌：去除未結合的游離分子。

3. 加樣：加入待檢測樣品，使抗原與抗體在固相載體上結合。

4. 洗滌：去除未結合的游離分子。

5. 加酶標記二抗：加入酶標記的二抗，與結合在固相載體上的抗原或抗體結合。

6. 洗滌：去除未結合的游離分子。

7. 加底物：加入底物，酶標記二抗催化底物生成產(chǎn)物。

8. 終止反應：加入終止劑，終止酶促反應。

9. 測量：通過酶標儀測量產(chǎn)物生成量，從而間接反映待檢測生物分子的含量。

四、應用

1. 生物科研：ELISA技術在生物科研領域中發(fā)揮著重要作用，可用于檢測蛋白質、肽、抗原、抗體等生物分子，為研究生物體內的生物過程提供有力支持。

2. 臨床診斷：ELISA技術在臨床診斷中具有廣泛應用，如病毒感染、細菌感染、自身免疫性疾病、腫瘤標志物等檢測。

3. 疾病監(jiān)測：ELISA技術可用于疾病監(jiān)測，如傳染病、慢性病等，為及時發(fā)現(xiàn)和控制疾病提供重要手段。

4. 疫苗研發(fā)：ELISA技術在疫苗研發(fā)中具有重要意義，可用于檢測疫苗抗原、評估疫苗免疫效果等。

5. 食品安全：ELISA技術在食品安全領域也有應用，如檢測食品中的有害物質、病原體等。

五、優(yōu)缺點

1. 優(yōu)點：高靈敏度、高特異性、操作簡便、易于自動化、適用于多種樣品類型。

2. 缺點：對樣品制備和操作要求較高、可能出現(xiàn)假陽性結果、成本相對較高。

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