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不同生物樣品在進(jìn)行TEM測(cè)試前應(yīng)該如何取材送樣？
來(lái)源：測(cè)試GO 時(shí)間：2022-11-08 09:58:12 瀏覽：3844次

生物樣本透射電鏡（TEM）適用于生物樣品（細(xì)胞，生物組織）材料內(nèi)部形貌的分析和研究。在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)之前，取材和送樣是至關(guān)重要的，如果處理不當(dāng)則會(huì)直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。本文向大家介紹，在我們進(jìn)行生物樣本透射電鏡測(cè)試前動(dòng)物普通組織以及培養(yǎng)細(xì)胞的取材、送樣。

 生物樣本透射電鏡測(cè)試案例圖


動(dòng)物普通組織取材、送樣：

取材原則：切薄并盡快投入固定液；注意下述要求。

1. 請(qǐng)盡快固定。動(dòng)物組織最好在離體后1 min內(nèi)開(kāi)始固定。

2. 非灌注的組織，厚度不超過(guò)4 mm，請(qǐng)用恰當(dāng)方式（比如切寬薄片）體現(xiàn)位置和層次關(guān)系。盡量不要事先切成很小的顆粒。

3. 請(qǐng)用鋒利薄刀片切組織，朝一個(gè)方向劃，不要來(lái)回切割，不要擠壓、拉扯。

4. 含有食物殘?jiān)ㄈ缦溃⒋罅垦海ㄈ缧募。┗蚱渌じ轿铮ㄈ缛橄俚龋┑慕M織，請(qǐng)用生理鹽水快速漂洗，再投入固定液。

5. 請(qǐng)保證固定液量充足。固定液和組織的體積比不小于20 : 1。

6. 最初的30 min以后，最好在4 ℃的固定液中浸泡，嚴(yán)禁結(jié)冰（太靠近冰箱后壁或冰袋運(yùn)輸都可能使組織結(jié)冰。冬季寧可常溫送樣）。

備注：

（1）組織尺寸和容器關(guān)系（只裝一個(gè)的參考標(biāo)準(zhǔn)）：

芝麻到綠豆大?。ㄈ缧∈竽I上腺）：請(qǐng)用1.5 ml EP管；

黃豆大?。ㄐ∈竽I臟）：請(qǐng)用5 ml離心管；

鋪展面積類似蠶豆大小的組織片：請(qǐng)用平底的25 ml廣口瓶；

（2）每個(gè)容器含有N個(gè)組織時(shí)：容器體積要適當(dāng)增大，組織不要相互擠壓變形。

 

培養(yǎng)細(xì)胞常規(guī)簡(jiǎn)易取材、送樣：

1. 最好刮取細(xì)胞，收集在離心管中，1500 rpm離心5 ~ 10 min（該參數(shù)可按自己的經(jīng)驗(yàn)調(diào)整，目的是不損傷細(xì)胞結(jié)構(gòu)的情況下去掉培養(yǎng)液成分）。

2. 棄上清，加入固定液重懸細(xì)胞。

3. 細(xì)胞懸液盡快（1分鐘內(nèi)，久了離心難以緊固）轉(zhuǎn)移至1.5 ml尖底EP管，立即以10000 r/min離心12 min（該參數(shù)適用于一般小型臺(tái)式離心機(jī)，不可隨意更改，務(wù)必使細(xì)胞離緊不散）；離緊后的細(xì)胞約半顆綠豆大小，切不可太大。

4. 靜置15 min，然后小心棄上清，再沿管壁緩慢加入室溫或4 ℃固定液（不可沖擊、吹散細(xì)胞）。

5. 在4 ℃保存或運(yùn)輸。嚴(yán)禁結(jié)冰（太靠近冰箱后壁或冰袋運(yùn)輸都可能使組織結(jié)冰。冬季寧可常溫送樣）。

備注：

（1）對(duì)細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)沒(méi)有特殊觀察要求的動(dòng)物細(xì)胞，均可按本法操作，比如精子、血液、脫落細(xì)胞等。薄壁細(xì)菌也可按本法處理。

（2）觀察細(xì)胞連接的實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用消化的方法收集細(xì)胞。

（3）不耐受高速離心的樣品，請(qǐng)以懸液送樣。盡可能裝滿，以減少運(yùn)輸途中的震蕩。

（4）厚壁真菌等離心緊固后不易滲透的樣品，也請(qǐng)以懸液送樣，要求同上。

 

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