日本久久久久久一区-国产麻豆乱视频av-日韩黄色一级免费电影-精品久久久久久久二区-久久亚洲精品尤物-久久久久偷看国产亚洲87-日韩精品资源在线观看,-久久草视频免费观看-亚洲少妇久久嫩13,91精品福利小视频,日韩欧美熟妇在线播放,亚洲成熟女人毛茸茸

預存

登錄注冊

Document

當前位置：文庫百科 ? 文章詳情

實時熒光定量PCR實驗中會出現(xiàn)的問題有哪些？

來源：測試GO 時間：2022-10-28 11:34:10 瀏覽：5156次

在科研人員進行實時熒光定量PCR的實驗操作中遇到了不計其數(shù)的問題，本文就給大家分享在實驗過程中出現(xiàn)頻率最高的一些問題：

內(nèi)參基因COL1(擴增曲線)

一、Ct值出現(xiàn)

檢測熒光信號的步驟有誤:一般SybrGreen法采用72℃延伸時采集，Taqman法則一般在退火結束時或延伸結束采集信號。

1、引物或探針降解:可通過PAGE電泳檢測其完整性。

2、模板量不足:對未知濃度的樣品應從系列稀釋樣本的最高濃度做起。

3、模板降解:避免樣品制備中雜質(zhì)的引入及反復凍融的情況。

二、Ct值出現(xiàn)過晚（Ct>38）

1、擴增效率低:反應條件不夠優(yōu)化。設計更好的引物或探針；改用三步法進行反應；適當降低退火溫度；增加鎂離子濃度等。

2、PCR各種反應成分的降解或加樣量的不足。

3、PCR產(chǎn)物太長:一般采用80-150bp的產(chǎn)物長度。

三、溶解曲線不止一個主峰

1、引物設計不夠優(yōu)化：應避免引物二聚體和發(fā)夾結構的出現(xiàn)。

2、引物濃度不佳：適當降低引物的濃度，并注意上下游引物的濃度配比。

3、鎂離子濃度過高：適當降低鎂離子濃度，或選擇更合適的mix試劑盒。

4、模板有基因組的污染：RNA提取過程中避免基因組DNA的引入，或通過引物設計避免非特異擴增。

四、擴增效率低

1、反應試劑中部分成分特別是熒光染料降解。

2、反應條件不夠優(yōu)化：可適當降低退火溫度或改為三步擴增法。

3、反應體系中有PCR反應抑制物：一般是加入模板時所引入，應先把模板適度稀釋，再加入反應體系中，減少抑制物的影響。

測試狗文庫百科

上一篇：干貨滿滿！「模擬計算干貨」匯總大放送，你想要的都在這里~

下一篇：實時熒光定量 PCR檢測技術在生物學的用途

BET氣體吸附原理及其技術發(fā)展

2025-02-21

熱重分析（TG-DTG）曲線的幾種解析方法

2023-12-26

一文詳解掃描電子顯微鏡(SEM)的工作原理及應用技術

2023-10-08

一文詳細介紹he染色的基本原理、實驗步驟及注意事項

2023-11-23

接觸角測試（CA）的原理、樣品制備要求及實際應用

2023-11-16

恒電流間歇滴定法GITT的基本原理以及測試教程

2022-08-12

熱門文章/popular

基礎理論丨一文了解XPS（概念、定性定量分析、分析方法、譜線結構）

手把手教你用ChemDraw 畫化學結構式：基礎篇

晶體結構可視化軟件 VESTA使用教程（下篇）

【科研干貨】電化學表征：循環(huán)伏安法詳解（上）

電化學實驗基礎之電化學工作站篇（二）三電極和兩電極體系的搭建和測試

【科研干貨】電化學表征：循環(huán)伏安法詳解（下）

微信掃碼分享文章

感谢您访问我们的网站，您可能还对以下资源感兴趣：

日本久久久久久一区-国产麻豆乱视频av-日韩黄色一级免费电影-精品久久久久久久二区-久久亚洲精品尤物-久久久久偷看国产亚洲87-日韩精品资源在线观看,-久久草视频免费观看-亚洲少妇久久嫩13,91精品福利小视频,日韩欧美熟妇在线播放,亚洲成熟女人毛茸茸 WmOrt

日本久久久久久一区-国产麻豆乱视频av-日韩黄色一级免费电影-精品久久久久久久二区-久久亚洲精品尤物-久久久久偷看国产亚洲87-日韩精品资源在线观看,-久久草视频免费观看-亚洲少妇久久嫩13 日本久久久久久一区-国产麻豆乱视频av-日韩黄色一级免费电影-精品久久久久久久二区-久久亚洲精品尤物-久久久久偷看国产亚洲87-日韩精品资源在线观看,-久久草视频免费观看-亚洲少妇久久嫩13 日本久久久久久一区-国产麻豆乱视频av-日韩黄色一级免费电影-精品久久久久久久二区-久久亚洲精品尤物-久久久久偷看国产亚洲87-日韩精品资源在线观看,-久久草视频免费观看-亚洲少妇久久嫩13